溶菌酶含量检测方法沈阳
合意五金网 2022-08-19 19:04:33
溶菌酶含量检测方法
溶菌酶含量检测方法 2012年05月25日 来源: 溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白,属乙酰多糖酶。存在于唾液、乳汁、泪液和鼻及气管等分泌物中,能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 ),使它能与细菌牢固结合,并水解细菌细胞壁肽聚糖,使细菌裂解死亡。 本实验在平板上进行唾液… 溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白,属乙酰多糖酶。存在于唾液、乳汁、泪液和鼻及气管等分泌物中,能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 ),使它能与细菌牢固结合,并水解细菌细胞壁肽聚糖,使细菌裂解死亡。 本实验在平板上进行唾液酶的测定。溶菌酶与枯草芽胞杆菌( Bacillus subtilis )作用后,可使该菌因细胞壁破坏而溶解,致使琼脂板加样孔周围出现溶菌环。溶菌环直径与样品中溶菌酶含量的对数呈直线关系。
【材料】
1• 无菌 PBS ( pH6.4 , 1/15mol/L ), 5mol/LKOH , 3%PBS 琼脂,溶菌酶标准品,受验者唾液。
2• 枯草芽胞杆菌 12 小时培养物。
3• 10×100 试管,试管架,无菌平皿,打孔器,微量加样器。
4• 分光光度计,水浴箱,温箱等。
【方法】
1. 菌液配制:将 PBS 加入枯草芽胞杆菌斜面,置室温 5-10 分钟后制成菌悬液;在波长 640nm 处,测定菌悬液的浓度,并将菌液浓度调至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶标准液配制:称取溶菌酶标准品,用 PBS 配成 1000 m g/ml ,置冰箱冻存,临用时再稀释成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液标本:待检测者用清水漱口后,将唾液收集于消毒平皿内待用。
4. 加热融化 3% 琼脂,冷至 60 -70℃ ,与预热好的枯草芽胞杆菌菌悬液等体积混合,到平板。用打孔器在平板上打孔,孔间距约 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 个。
5. 各孔内依次加溶菌酶标准品和唾液样品,每孔 20 m l 。
6. 置于 24 -26 ℃ 12-18 小时后测量溶菌环直径。
【结果判断】
记录溶菌环的直径( mm )于下表,绘制标准曲线,并从标准曲线上查出所测样品的溶菌酶含量。
【作业】
1• 记录标准溶菌酶样品的溶菌环直径,绘制标准曲线。
2• 记录和报告唾液样品的溶菌酶含量。
图 2-1 唾液样品中的溶菌酶作用与枯草芽孢杆菌产生的溶菌环。上排为溶菌酶标准液作用
后产生的溶菌环,下排为唾液样品中的溶菌酶作用后产生的溶菌环。
- 最好减负1010亿元佛山供给侧结构性改革为企磁条卡光跳线临沧数控铣床油锯Trp
- 最好今天铁精粉价格行情1114RO纯水机发动机角锯气体分析仪无氧铜线Trp
- 最好2017年11月10日今日氧化钬行情查询纯净水机光功率计链钩数据电缆永磁滚筒Trp
- 最好剖析中国将成为全球大的智能家居市场冲床模具攻丝机冷库实验仪器仪表机床Trp
- 最好无人驾驶新时代宇通无人驾驶大客车测试引关点胶针杭州埋弧焊丝塑料链条肇庆Trp
- 最好俄罗斯联邦统计局前8月锌产量同比下降13电视接收机机米螺丝宁德砼搅拌站重力铸造机Trp
- 最好国家发改委批复同意苏州轨道交通S1线项目T型螺栓阀杆脚轮汽车吊五大连池Trp
- 最好中央经济工作会议在京闭幕电脑绗缝机混合机南安铁路配件制砂机Trp
- 最好交通工具用纺织品有巨大的发展空间磁力泵光收发器林州数控弯管机油过滤器Trp
- 最好太铁物流公司钢铝物流量逆势上扬电缆带缓冲磨粉机提取罐植毛机Trp
- 最好单灯LED路灯还是双灯LED路灯施工前要定西嘉兴片材挤出机微波传感器自动制袋机Trp
- 最好全自动水泥发泡保温板设备自动化程度高锤式破碎机光发射机链板束口钉永安Trp